کیت تست الایزا ضد HIV 1 و 2 برای ویروس نقص ایمنی انسانی

3. روش سنجش

• قبل از استفاده، اجازه دهید همه اجزا به دمای اتاق برسند.بافر شستشو غلیظ 1:20 را با ddH2O رقیق کنید.
• دو کنترل مثبت و سه کنترل منفی تنظیم کنید.100μl از کنترل مثبت (HIV-1 و HIV-2) و همچنین کنترل منفی را در دو نسخه در چاهک های مربوطه بدون رقیق کننده نمونه توزیع کنید.یک چاه خالی به عنوان کنترل پس زمینه بدون اضافه کردن مایع تنظیم کنید.50 میکرولیتر رقیق کننده نمونه را به هر چاه آزمایشی اضافه کنید، 50 میکرولیتر سرم آزمایشی یا پلاسما را به چاه های آزمایشی اضافه کنید و کاملاً مخلوط کنید.
• پلیت میکروتیتر را در یک جعبه مرطوب قرار داده و در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه انکوبه کنید.
• محلول واکنش را دور بریزید و 350 میکرولیتر بافر شستشوی رقیق شده را به هر چاهک اضافه کنید.بافر شستشو را پس از خیساندن به مدت 15 تا 30 ثانیه دور بریزید.روش شستشو را 5 بار تکرار کنید و سپس صفحه را به شدت برعکس کنید تا تمام آب خارج شود و لبه چاه ها روی کاغذ جاذب برای چند ثانیه مسدود شود.
• 100 میکرولیتر آنزیم کونژوگه را به هر چاهک اضافه کنید.آن را به آرامی با چرخاندن صفحه میکروتیتر روی نیمکت صاف به مدت 1 دقیقه مخلوط کنید.آنزیم کونژوگه را به چاه خالی اضافه نکنید.
• پلیت میکروتیتر را در یک جعبه مرطوب قرار داده و در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه انکوبه کنید.
• هر چاه را 5 بار با پر کردن هر چاه با بافر شستشو رقیق شده 1X بشویید، سپس صفحه را به شدت برعکس کنید تا تمام آب خارج شود و لبه چاه ها روی کاغذ جاذب برای چند ثانیه مسدود شود.
• به هر چاهک 50 میکرولیتر محلول بستر A (بستر HRP) اضافه کنید، سپس به هر چاهک 50 میکرولیتر محلول بستر B (TMB) اضافه کنید.به آرامی مخلوط کرده و در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه انکوبه کنید.
• یک قطره (50 میکرولیتر) از محلول توقف را به هر چاه اضافه کنید تا واکنش رنگ متوقف شود.
• مقدار OD را در 450 نانومتر/630 نانومتر با صفحه خوان فیلتر دوگانه بخوانید.این گزینه برای خواندن مقدار OD در 450 نانومتر با صفحه خوان تک فیلتر است.(با استفاده از مقدار OD چاه خالی برای تصحیح تمام قرائت OD از همه چاه ها