نوار تست Elisa LH ISO13485 کیت تست هورمون لوتئین کننده 96 عدد

LH Elisa Kit هورمون لوتئین کننده

1. استفاده مورد نظر

ایمونواسی برای تعیین کمی در شرایط آزمایشگاهی هورمون لوتئینیزه کننده در سرم انسانی

2. خلاصه

• LH (هورمون لوتئینیزه)، همراه با FSH (هورمون محرک فولیکول)، متعلق به خانواده گنادوتروپین ها است.LH و FSH رشد را تنظیم و تحریک می کنند و عملکرد غدد جنسی (تخمدان و بیضه ها) به صورت هم افزایی.مانند FSH، TSH و hCG، LH یک گلیکوپروتئین است که از دو زیرواحد (زنجیره های α و β) تشکیل شده است.(1، 2، 3) این پروتئوهورمون که از 121 اسید آمینه و سه زنجیره قند تشکیل شده است، دارای وزن مولکولی 29500 دالتون است.در زنان، گنادوتروپین ها در مدار تنظیم کننده هیپوتالاموس-هیپوفیز-تخمدان برای کنترل چرخه قاعدگی عمل می کنند.
• LH و FSH به صورت نبض از سلول های گنادوتروپیک هیپوفیز قدامی آزاد می شوند و از طریق جریان خون به تخمدان ها منتقل می شوند.در اینجا گنادوتروپین ها رشد و بلوغ فولیکول و در نتیجه بیوسنتز استروژن و پروژسترون را تحریک می کنند.بالاترین غلظت LH در اواسط سیکل رخ می دهد و باعث تخمک گذاری و تشکیل جسم زرد می شود که محصول اصلی ترشح آن پروژسترون است.در سلول های لیدیگ بیضه، LH تولید تستوسترون را تحریک می کند.تعیین غلظت LH برای روشن کردن اختلالات در سیستم هیپوتالاموس-هیپوفیز-گنادها استفاده می شود.تعیین LH در ارتباط با FSH برای موارد زیر استفاده می شود: بیماری های مادرزادی با انحرافات کروموزومی (مانند سندرم ترنر)، تخمدان پلی کیستیک (PCO)، روشن شدن علل آمنوره، سندرم یائسگی، و مشکوک به نارسایی سلول های لیدیگ.(1، 4، 5)

3. اصل تست

اصل ساندویچ.مدت زمان کل آزمون: 80 دقیقه.

• نمونه، میکرو چاه های پوشش داده شده Anti-LH و آنزیم با برچسب Anti-LH ترکیب شده اند.

• در طول انکوباسیون، LH موجود در نمونه اجازه واکنش نشان می دهد

به طور همزمان با دو آنتی بادی، در نتیجه مولکول های LH وجود دارد

بین فاز جامد و آنتی بادی های مرتبط با آنزیم قرار گرفته است.

• پس از شستشو، یک کمپلکس بین فاز جامد، LH درون نمونه و آنتی بادی های مرتبط با آنزیم توسط واکنش های ایمونولوژیکی ایجاد می شود.

• سپس محلول بستر اضافه می شود و توسط این کمپلکس کاتالیز می شود و در نتیجه یک واکنش کروموژنیک ایجاد می شود.واکنش کروموژنیک حاصل به عنوان جذب اندازه گیری می شود.

• جذب متناسب با مقدار LH در نمونه است.

معرف ها

مواد ارائه شده است

• میکروپلیت پوشش داده شده، نوارهای 8×12، 96 چاه، از پیش روکش شده با مونوکلونال ماوس

ضد LH

• کالیبراتورها، 6 ویال، هر کدام 1 میلی لیتر، آماده استفاده.غلظت ها: 0 (A)، 5 (B)، 20 (C)، 50 (D)، 100 (E) و 200 (F) mIU/mL.

آنزیم کونژوگه، 1 ویال، 11 میلی لیتر HRP (پراکسیداز ترب کوهی) دارای برچسب مونوکلونال Anti-LH موش در بافر Tris-NaCl حاوی BSA (آلبومین سرم گاوی).حاوی 0.1% نگهدارنده ProClin300.

• سوبسترا، 1 ویال، 11 میلی لیتر، آماده مصرف، (tetramethylbenzidine) TMB.

• محلول توقف، 1 ویال، 6.0 میلی لیتر اسید سولفوریک 1 mol/L.

• کنسانتره محلول شستشو، 1 ویال، 25 میلی لیتر (40X غلیظ)، PBS-Tween

محلول شستشو

• IFU، 1 کپی.

• درب بشقاب: 1 عدد.

مواد مورد نیاز (اما ارائه نشده)

• میکروپلیت ریدر با قابلیت جذب طول موج 450 نانومتر و 620 نانومتر.

• واشر میکروپلیت.

• ماشین جوجه کشی

4. روش تست

• فقط از تعداد چاه های مورد نیاز استفاده کنید و چاه های میکروپلیت ها را برای آن فرمت کنید

هر کالیبراتور و نمونه مورد سنجش قرار گیرد.

• به هر چاهک 25 میکرولیتر کالیبراتور یا نمونه اضافه کنید.

• 100 میکرولیتر کونژوگه آنزیمی را به هر چاهک اضافه کنید.

• میکروپلیت را به مدت 30 ثانیه به آرامی تکان دهید تا مخلوط شود.

• روی صفحه را با درب بشقاب بپوشانید و در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 60 دقیقه انکوبه کنید.

• محتویات میکرو پلیت را با تخلیه یا آسپیراسیون دور بریزید.اگر

بشقاب را با کاغذ جاذب خشک کنید، ضربه بزنید و خشک کنید.

• 350 میکرولیتر محلول شستشو اضافه کنید، آن را تخلیه کنید (با ضربه زدن و لکه) یا آسپیره کنید.4 بار دیگر برای مجموع 5 شستشو تکرار کنید.می توان از یک شستشوی نواری میکروپلیت خودکار استفاده کرد.در پایان شستشو، صفحه را برعکس کنید و محلول شستشوی باقیمانده را روی کاغذ جاذب بمالید.

• 100 میکرولیتر بستر را به هر چاهک اضافه کنید.

• در دمای محیط (25-18 درجه سانتیگراد) در تاریکی برای واکنش به مدت 20 دقیقه انکوبه کنید.پس از افزودن بستر، صفحه را تکان ندهید.

• به هر چاهک 50 میکرولیتر محلول توقف اضافه کنید.

• به مدت 15-20 ثانیه تکان دهید تا مایع درون چاهک مخلوط شود.مهم است که

اطمینان حاصل کنید که رنگ آبی به طور کامل به زرد تغییر می کند.

• جذب هر چاهک را در 450 نانومتر بخوانید (با استفاده از 620 تا 630 نانومتر

طول موج مرجع برای به حداقل رساندن عیوب چاه) در یک صفحه خوان میکرو.