EBV-VCA IgA Ab Test ELISA کیت آنزیم ایمونواسی نمونه پلاسما

شماره کاتالوگ کیت EBV-VCA IgA Ab ELISA: BE501A
ایمونواسی آنزیمی برای تشخیص آنتی بادی IgA به آنتی ژن کپسید ویروسی (VCA) ویروس اپشتین بار (EBV).
 
1. اصل سنجش
کیت EBV-VCA IgA Ab ELISA از یک سیستم تشخیص استفاده می کند که در آن چاه های میکروپلیت با آنتی ژن نوترکیب مربوط به بخش بسیار آنتی ژن EBV-VCA پوشانده شده اند.نمونه های سرم یا پلاسما، کنترل ها به چاهک ها اضافه می شوند.در طول انکوباسیون، آنتی بادی های IgA اختصاصی برای EBV-VCA موجود در نمونه به آنتی ژن نوترکیب ثابت شده روی چاهک های میکروپلیت متصل می شوند.چاهک ها برای حذف مواد غیر متصل شسته می شوند و کنژوگه ضد IgA پراکسیداز انسانی به کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی متصل می شود و مزدوج های اضافی آنزیمی غیر متصل دوباره با شستشو حذف می شوند.سوبسترای آنزیمی، تترمتیل بنزیدین (TMB)، پس از انکوباسیون اضافه می شود، سوبسترا توسط آنزیم متصل هیدرولیز می شود و رنگ آبی یا سبز آبی در چاه های حاوی آنتی بادی های EBV-VCA IgA ایجاد می شود.واکنش آنزیمی با افزودن اسید سولفوریک متوقف می شود.شدت رنگ ایجاد شده به صورت اسپکتروفتومتری در 450 نانومتر (450 نانومتر/630 نانومتر) خوانده می شود و متناسب با مقدار آنتی بادی های موجود در نمونه است.
معرفها
 
2. مواد ارائه شده با کیت ها:

 
3. روش سنجش

1. کیت ELISA (همه معرفها) و نمونه ها را قبل از استفاده به دمای اتاق بیاورید (تقریباً 30 دقیقه).
2. بافر شستشو غلیظ 1:19 را با ddH2O رقیق کنید.به عنوان مثال، 5 میلی لیتر از کنسانتره بافر شستشو باید به حجم 100 میلی لیتر با آب دیونیزه یا مقطر رقیق شود.
3. برای هر آزمون، یک چاه خالی به عنوان کنترل پس زمینه، دو کنترل مثبت و سه کنترل منفی تنظیم کنید.100 میلی لیتر کنترل مثبت و کنترل منفی را در چاهک های جداگانه توزیع کنید.نه نمونه و نه HRP-Conjugate نباید به چاه خالی اضافه شود.
4. 100 میلی لیتر از رقت نمونه را در چاهک های آزمایشی جداگانه به جز کنترل ها توزیع کنید.
5. 10 میلی لیتر از هر نمونه آزمایش را به چاه های آزمایش اضافه کنید.گرداب برای مخلوط کردن.
6. به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه کنید
7. هر چاه را 5 بار با پر کردن هر چاه با بافر شستشوی رقیق شده بشویید، سپس صفحه را به شدت برعکس کنید تا تمام آب خارج شود و لبه چاه ها روی کاغذ جاذب برای چند ثانیه مسدود شود.
8. 100 میلی لیتر کنژوگه آنزیم را به هر چاهک اضافه کنید.آن را به آرامی با چرخاندن صفحه میکروتیتر روی نیمکت صاف به مدت 1 دقیقه مخلوط کنید.آنزیم کونژوگه را به چاه خالی اضافه نکنید.
9. به مدت 20 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه کنید
10. بشقاب را 5 بار همانند مرحله 7 بشویید.
11. یک قطره (50 میلی لیتر) از محلول سوبسترای A (بستر HRP) را به هر چاهک اضافه کنید، سپس یک قطره (50 میلی لیتر) از محلول بستر B (TMB) را به هر چاهک اضافه کنید.به آرامی مخلوط کرده و در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 30 دقیقه انکوبه کنید..
12. یک قطره (50 میلی لیتر) محلول توقف را به هر چاه اضافه کنید تا واکنش رنگ متوقف شود.مقدار OD را در 450 نانومتر/630 نانومتر با صفحه خوان فیلتر دوگانه بخوانید.این گزینه برای خواندن مقدار OD در 450 نانومتر با صفحه خوان تک فیلتر است.(با استفاده از مقدار OD چاه خالی برای تصحیح تمام قرائت OD از همه چاه ها)