کیت تست آنتی بادی آنتی تیروگلوبولین BIOVANTION Anti Tg Ab Test

Anti-Tg ELISA TEST KIT Thyroglobulin Ab

1. استفاده مورد نظر

ایمونواسی برای تعیین کمی در شرایط آزمایشگاهی آنتی بادی های تیروگلوبولین در سرم انسانیتعیین anti-Tg به عنوان کمکی در تشخیص بیماری های خود ایمنی تیروئید استفاده می شود.

2. خلاصه

تیروگلوبولین (Tg) در غده تیروئید تولید می شود و جزء اصلی در لومن فولیکول تیروئید است.در همکاری با آنزیم پراکسیداز اختصاصی تیروئید (TPO)، Tg در ید زایی L-تیروزین و در تشکیل هورمون های تیروئید T4 و T3 نقش اساسی دارد.هر دو Tg و TPO به طور بالقوه اتوآنتی ژن هستند.

افزایش غلظت سرمی آنتی بادی ها علیه Tg (اتوآنتی بادی های Tg) در افراد مبتلا به تیروئیدیت مبتنی بر خودایمنی یافت می شود.غلظت بالای anti-Tg همراه با anti-TPO نشان دهنده تیروئیدیت مزمن لنفوسیتی-انفیلتراتیو (بیماری هاشیموتو) است.فراوانی آنتی‌بادی‌های تیروگلوبولین در افراد مبتلا به تیروئیدیت خودایمنی، از جمله بیماری هاشیموتو، و تقریباً 30 درصد در افراد مبتلا به بیماری گریوز، تقریباً 70 تا 80 درصد است. سنجش anti-Tg برای نظارت بر سیر تیروئیدیت هاشیموتو مهم است. برای تشخیص افتراقی (موارد مشکوک به تیروئیدیت خودایمنی با منشأ ناشناخته با نتایج آزمایش آنتی TPO منفی، بیماری گریوز بدون انفیلتراسیون لنفوسیتی، و برای رد مداخله اتوآنتی بادی های Tg در تست Tg).

اگرچه حساسیت این روش را می توان با تعیین همزمان آنتی بادی های تیروئید اضافی (ضد TPO، آنتی بادی های گیرنده TSH) افزایش داد، یک نتیجه منفی به طور قطع وجود یک بیماری خود ایمنی را رد نمی کند.سطح تیتر آنتی بادی با فعالیت بالینی بیماری ارتباطی ندارد.در صورت تداوم بیماری برای مدت طولانی تر یا در صورت وجود، تیترهایی که در ابتدا افزایش می یابند، می توانند منفی شوند

بهبودی رخ می دهد.اگر آنتی بادی ها پس از بهبودی دوباره ظاهر شوند، احتمال عود وجود دارد.

سنجش‌های ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم از آنتی‌ژن انسانی و آنتی‌بادی ضد IgG خرگوش (ضد IgG) استفاده می‌کند.

3. مواد معرف ارائه شده است

• میکروپلیت پوشش داده شده، نوارهای 8×12، 96 چاه.از قبل با آنتی ژن TG انسانی پوشیده شده است.

• کالیبراتورها، 6 ویال، هر کدام 1 میلی لیتر، آماده استفاده.غلظت: 0 (A)، 50 (B)، 150 (C)، 500 (D)، 1000 (E) و 2000 (F) IU/mL.

• کنژوگه آنزیم، 1 ویال، 11.0 میلی لیتر HRP (پراکسیداز ترب) نشاندار شده با آنتی بادی های ضد IgG خرگوش (ضد IgG) در بافر Tris-NaCl حاوی BSA (آلبومین سرم گاوی).حاوی 0.1% نگهدارنده ProClin300.

• رقیق کننده سرم: 1 ویال، 11 میلی لیتر.حاوی نمک های بافر و رنگ

• محلول شستشو، 1 ویال، 25 میلی لیتر (40X غلیظ)، محلول شستشو PBS-Tween.

• سوبسترا، 1 ویال، 11 میلی لیتر، آماده استفاده، (tetramethylbenzidine) TMB.

• محلول توقف، 1 ویال، 6.0 میلی لیتر اسید سولفوریک 1 مول در لیتر.

• IFU، 1 کپی.

• درب بشقاب: 2 عدد.

4. مواد مورد نیاز (اما ارائه نشده)

• میکروپلیت خوان با قابلیت جذب طول موج 450 نانومتر و 620 نانومتر.
• شستشوی میکروپلیت.
• ماشین جوجه کشی.
• بشقاب شوکر.
• میکروپیپت ها و میکروپیپت های چند کاناله که 50 میکرولیتر را با دقت بهتر از 1.5 درصد تحویل می دهند.
• کاغذ جاذب
• آب مقطر

5. روش تست

• فقط از تعداد چاه های مورد نیاز استفاده کنید و چاه های میکروپلیت را برای هر کالیبراتور و نمونه مورد سنجش فرمت کنید.

• به هر چاهک 100 میکرولیتر کالیبراتور اضافه کنید.

• 100 میکرولیتر نمونه رقیق کننده (رنگ سبز) را به هر چاهک به جز چاهک کالیبراتور اضافه کنید.

• 10 میکرولیتر از نمونه را به هر چاه رقیق کننده نمونه اضافه کنید (توجه: معرف های چاهک از سبز به رنگ آبی در می آیند)، سپس 30 ثانیه تکان دهید.

• بشقاب را با درب بشقاب بپوشانید و به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه کنید.

• محتویات میکرو پلیت را با تخلیه یا آسپیراسیون دور بریزید.در صورت تخلیه، ضربه بزنید و صفحه را با کاغذ جاذب خشک کنید.

• 350 میکرولیتر محلول شستشو اضافه کنید، آن را تخلیه کنید (با ضربه بزنید و لکه بزنید) یا آسپیره کنید.4 بار دیگر برای مجموع 5 شستشو تکرار کنید.در پایان شستشو، صفحه را برعکس کنید و محلول شستشوی باقیمانده را روی کاغذ جاذب بمالید.

• 100 میکرولیتر آنزیم مزدوج اضافه کنید،

• بشقاب را با درب بشقاب بپوشانید و در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه انکوبه کنید

• 350 میکرولیتر محلول شستشو اضافه کنید، آن را تخلیه کنید (با ضربه بزنید و لکه بزنید) یا آسپیره کنید.4 بار دیگر برای مجموع 5 شستشو تکرار کنید.در پایان شستشو، صفحه را برعکس کنید و محلول شستشوی باقیمانده را روی کاغذ جاذب بمالید.

• 100 میکرولیتر از بستر را به هر چاهک اضافه کنید.روی آن را بپوشانید و در دمای محیط (25-18 درجه سانتیگراد) در تاریکی به مدت 10 دقیقه انکوبه کنید.پس از افزودن بستر، صفحه را تکان ندهید.

• به هر چاهک 50 میکرولیتر محلول توقف اضافه کنید.

• به مدت 15-20 ثانیه تکان دهید تا مایع درون چاه ها مخلوط شود.مهم است که اطمینان حاصل شود که رنگ آبی به طور کامل به زرد تغییر می کند.

• میزان جذب هر چاهک را در 450 نانومتر (با استفاده از 620 تا 630 نانومتر به عنوان طول موج مرجع برای به حداقل رساندن عیوب چاه) در صفحه خوان میکرو بخوانید.نتایج باید ظرف 30 دقیقه پس از افزودن محلول توقف خوانده شود.