کیت آزمایش آنتی بادی (IgE) ELISA

استفاده مورد نظر

  این کیت یک تشخیص کمی از کل آنتی بادی IgE (IgE) در سرم / پلاسما انسان در آزمایشگاه است. این نتیجه می تواند به تشخیص آلرژی نوع I کمک کند.آزمایش IgE کل نیز ممکن است برای بیماران مبتلا به بیماری های انگلی مشکوک توصیه شود..

اصل آزمون

  بیش از حد حساسیت فوری (آلرژی نوع I) توسط IgE خاص تداخل می کند.افزایش IgE خاص در بیماران همراه با افزایش کل IgEدر این مورد، تایتر می تواند تا 1000 برابر افزایش یابد. به طور کلی، واحدهای بین المللی در میلی لیتر (IU / mL) به این شکل تعریف می شوند: 1 IU / mL برابر با 2.4ng IgE است. در بیماران مبتلا به درماتیت آلرژیک ارثی،سطح IgE می تواند تا 50 باشد.علاوه بر این، تیترهای IgE در بیماران مبتلا به بیماری های انگل دار افزایش می یابد. نتایج آزمایش بالاتر از حد معمول نیز باید تاثیر بیماری های خود ایمنی تایید شده را در نظر بگیرد.

واکنشگر برای معاینه فیزیکی افراد سالم توصیه نمی شود، نتایج آزمایش مثبت یا منفی فقط به نام نتایج آزمایش آنتی بادی IgE مربوطه مثبت یا منفی است.عدم قطعیت ارتباط با بیمار بیمار است و ممکن است تنها شاخص ارزیابی بیماران نباشد، باید با ارائه بالینی بیمار و سایر آزمایشات آزمایشگاهی برای تجزیه و تحلیل یکپارچه بیماری ترکیب شود.

روش تشخیص این کیت، آزمایش ایمنی مرتبط با آنزیم است. در این واکنشگر، اصل آزمایش ایمنی ساندویچ آنتی بادی دوگانه پذیرفته شده است.آنتی بادی های مونوکلونال که ضد IgE را تشخیص می دهند در چاه های میکروپلاکت از قبل پوشانده شده اند، و نمونه های سرم/پلازما انسان و یک آنتی بادی مونوکلونال با برچسب آنزیم به منافذ صفحه اضافه شد. پس از حشره کشی و شستن، محلول بستر اضافه شد.مقدار OD خوانده شد و محتوای آن توسط یک خواننده میکروپلاکت محاسبه شد.

روش آزمایش

1.قبل از استفاده باید اجازه داده شود که تمام واکنشگرها به دمای اتاق برای 15 دقیقه برسند.

2. پیش از استفاده با آب تقطیر شده با سرعت تخلیه 1:40 آب شوینده را تخلیه کنید.

3نمونه باید متناسب با تعداد صفحه های میکرو باشد، هر صفحه باید با چاه های مرجع ارائه شود (شمار چاه با مرجع و نمونه مورد آزمایش تعیین می شود).

توجه: برای هر نمونه، از نوک پیپیت دفع جداگانه استفاده کنید، هر مرجع برای جلوگیری از آلودگی متقابل.

4.100μL مخلوط کننده نمونه را به چاه معادل اضافه کنید، 20μL هر نمونه مرجع S0, S1, S2, S3, S4, S5 و نمونه را به چاه معادل اضافه کنید.

5به آرامی تکان دهید تا مخلوط شود. در 37 درجه سانتیگراد برای 30 دقیقه با غشای صفحه مهر و موم، صفحه مهر و موم کنید.

6. در پایان انکوبیشن، پوشش بشقاب را بردارید و دور بیندازید. خارج کنید، آب پاشی را به هر چاه برای 10 ثانیه اضافه کنید. 5 بار تکرار کنید. پس از چرخه شستشوی نهایی،بشقاب را روی کاغذ یا حوله تمیز بگذارید.و به آن ضربه بزنید تا بقایای موجود را از بین ببرید.

7به ترتیب اضافه کردن 100μL کنژوگیت. در 37°C برای 30 دقیقه با غشای صفحه مهر و موم کردن صفحه مهر و موم کنید.

8ظرف رو مثل مرحله 6 بشوريد

9. سبسترات A (50μL) و سبسترات B (50μL) را اضافه کنید. به آرامی تکان دهید تا مخلوط شود. در 37 °C برای 10 دقیقه با غشای صفحه مهر و موم، صفحه را مهر و موم کنید.

10. 50μL Stop Solution را به هر چاه اضافه کنید. به آرامی با تکان دادن مخلوط کنید، جذب را در عرض 10 دقیقه پس از متوقف کردن واکنش بخوانید.سپس مقدار جذب در 450nm/ 630nm را با خواننده میکروپلاکت بخوانید.غلظت را محاسبه کنید و نتایج را ارزیابی کنید.