کیت آزمایش ELISA ویتامین D 25-OH

استفاده مورد نظر

کیت تشخیص ویتامین D 25-OH (بررسی انزایمی مرتبط با ایمونوسوربنتی ، ELISA). این کیت در آزمایش های کمی برای ویتامین D در سرم انسان استفاده می شود.

خلاصه و اهمیت بالینی

ویتامین D یک پیشگام هورمون محلول در چربی است که عمدتاً در پوست با قرار گرفتن در معرض نور خورشید تولید می شود. ویتامین D بیولوژیکی بی اثر است و باید مراحل هیدروکسیلی را طی کند تا فعال شود.بدن ما فقط می تونه ویتامین D3 رو ترکیب کنهویتامین D2 با مواد غذایی غنی شده یا با مکمل ها مصرف می شود.ویتامین D3 و D2 به پروتئین اتصال ویتامین D (VDBP) در پلاسما متصل می شوند و به کبد منتقل می شوند تا به ویتامین D 25- هیدروکسی (25-OH) تبدیل شونداز آنجا که ویتامین D 25-OH شکل اصلی ذخیره سازی را نشان می دهد، غلظت خون آن برای ارزیابی وضعیت کلی ویتامین D استفاده می شود. بیش از 95٪ ویتامین D 25-OH، قابل اندازه گیری در سرم،در حالی که ویتامین D2 فقط در بیماران مصرف کننده مکمل ویتامین D2 به سطوح قابل اندازه گیری می رسد.ویتامین D برای سلامت استخوان ها ضروری است. در کودکان، کمبود شدید منجر به ریچیت می شود. در افراد مسن، خطر سقوط به دلیل کمبود ویتامین D به دلیل ضعف عضلانی است.,غلظت پایین ویتامین D 25-OH با تراکم معدنی استخوان پایین تر مرتبط است. کمبود آن همچنین با دیابت، سرطان، بیماری های قلبی عروقی و بیماری های خود ایمنی مرتبط است.هر دو مکمل غذایی ویتامین D که در حال حاضر در بازار در دسترس هستند (ویتامین D2 و ویتامین D3) در کبد به ویتامین D 25-OH تبدیل می شوند.جمع غلظت ویتامین D2 و ویتامین D3 در سرم یا پلاسما به عنوان “کل ویتامین D25-OH” نامیده می شود.نظارت دقیق بر کل سطح ویتامین D 25-OH در محیط های بالینی بسیار مهم است.. Vitamin D deficient patients who are prescribed a daily Vitamin D supplement should regularly monitor their serum or plasma Vitamin D levels in order to reach an optimal level and prevent their 25-OH Vitamin D concentrations from reaching excessive levels that are considered toxicآزمایش کل ویتامین D از آنتی بادی های ویژه برای جذب هر دو 25- هیدروکسی ویتامین D3 و D2 استفاده می کند.این آزمایش برای تعیین کمی کل ویتامین D 25-OH در سرم و پلاسما انسان طراحی شده است.، به عنوان یک کمک در ارزیابی کافی بودن ویتامین D.

اصل

کیت آزمایش کمی ویتامین D 25-OH بر اساس یک آزمایش ایمونوسوربنتی مرتبط با آنزیم در فاز جامد است.سیستم آزمایش از یک آنتی بادی برای بی حرکت کردن فاز جامد (خونه های میکروتیتر) و یک آنتی بادی مونوکلونال دیگر در محلول ها استفاده می کند.سومین آنتی بادی که آنتی بادی دوم را که با یک آنزیم (پروکسیداز هاردین) ترکیب شده است تشخیص می دهد.استاندارد ها و نمونه آزمایش (سروم) به چاه های میکروتیتر پوشانده با آنتی بادی ویتامین D 25-OH اضافه می شوند.، تخمک گذاری 30 دقیقه با آنتی بادی دوم. پس از شستشوی، آنتی بادی سوم با پروکسیداز هویج (جفت) برچسب گذاری شده اضافه می شود. اگر ویتامین D 25-OH انسانی در نمونه وجود داشته باشد,آن با آنتی بادی روی چاه و آنزیمی که به آن متصل می شود ترکیب می شود و در نتیجه بین فاز جامد و آنتی بادی های مرتبط با آنزیمی، ساندویچ تشکیل می شود.چاه ها با آب شسته می شوند تا آنتی بادی های نامبرده را از بین ببرند. یک محلول TMB اضافه شده و برای 20 دقیقه تزریق می شود، که در نتیجه ایجاد یک رنگ آبی است. توسعه رنگ با اضافه کردن راه حل Stop متوقف می شود.رنگ به رنگ زرد تغییر می کند و به صورت طیف فتو متریک در 450 نانومتر اندازه گیری می شود.غلظت ویتامین D مستقیما متناسب با شدت رنگ نمونه آزمایش است.

ماده های واکنش دهنده ارائه شده

مایکروپلاکت پوشش داده شده: 1 صفحه (8×12 چاه) ، آماده استفاده. صفحه میکروتیتر ضد- 25-OH ویتامین D پوشش داده شده و در یک کیسه آلومینیومی بسته شده است.نوارها را در کیسه ای که دوباره بسته می شود با یک خشک کننده برای محافظت از رطوبت پس از باز کردن خارج کنید.۲ تا ۸ درجه تا تاریخ انقضا نگهداری کنید.

HRP کنژوگیت:1 بطری 22 میلی لیتر، آماده استفاده نگه دارید در 2 ~ 8 °C تا تاریخ انقضا.

کالیبراسیون:6 فنجان 0. 2 میلی لیتر با برچسب S0 تا S5 و غلظت PRL 0, 10, 20, 50,100150 ng/ ml نگه دارید در 2 ~ 8°C تا تاریخ انقضا.

کنترل:2 ورقه 0. 2 میلی لیتر

ویتامین D نمونه رقیق کننده:1 فنجان 22 میلی لیتر، آماده برای استفاده نگه دارید در 2 ~ 8 °C تا تاریخ انقضا.

زیربنای TMB:1 فنجان 12 میلی لیتر، آماده برای استفاده نگه دارید در 2 ~ 8 °C تا تاریخ انقضا.

راه حل متوقف کنید:1 فنجان 12 میلی لیتر، آماده برای استفاده نگه دارید در 2 ~ 8 °C تا تاریخ انقضا.

بافر شستن:1 فنجان 15 میلی لیتر، 50 برابر متمرکز شده، قبل از آزمایش با آب دیونیزه شده رقیق شود.

سفت کننده صفحه:دو تا

کیسه پلاستیکی قابل بازپوشیدن:یه مجموعه

راهنمای استفاده:یک کپی

آماده سازی

1اجازه دهید تمام نمونه ها و واکنش ها به دمای اتاق (~ 25 °C) برسند و قبل از استفاده با تغییر باریک به طور کامل مخلوط شوند.

2آماده کردن واش بافر با رقیق کردن Wash Concentrate 20 برابر با آب دیونیزه شده. محلول شستشو رقیق شده در دمای اتاق حداقل یک هفته پایدار است.

احتیاط برای مصرف کنندگان

1- استفاده از هر نوع پیپتیشن از طریق دهان ممنوع است.

2مواد از دسته های مختلف را مخلوط نکنید. از اجزای کیت بعد از تاریخ انقضا استفاده نکنید.

3.همه مواد باید قبل از استفاده به دمای اتاق منتقل شوند.