آنتی بادی برای آنتی ژن اصلی ویروس هپاتیت B (HBcAb)

ELISA TاستKاون

فقط برای استفاده حرفه ای و تشخیصی in vitro.

نام محصول

کیت آزمایش ELISA ضد HBc (سروم/پلازما)

استفاده مورد نظر

این کیت آزمایش ELISA ضد HBc یک تشخیص کیفی از آنتی بادی ها در برابر آنتی ژن هسته ای ویروس هپاتیت B (HBcAb) در سرم/پلاسمای انسان است.واکنشگر برای غربالگری بالینی و تشخیص عفونت ویروس هپاتیت B در سرم/پلاسمای انسان مناسب است..

اصول آزمون

ویروس هپاتیت B (HBV) یک پاکت است،ویروس DNA دو رشته ای متعلق به خانواده Hepadnaviridae و به عنوان علت اصلی هپاتیت های منتقل شده از طریق خون به همراه ویروس هپاتیت C (HCV) شناخته شده استعفونت با HBV طیف وسیعی از علایم بالینی را از بیماری خفیف و نامشخص گرفته تا هپاتیت فلمی، بیماری های مزمن شدید کبد،که در برخی موارد می تواند منجر به سیروز و سرطان کبد شود.طبقه بندی عفونت هپاتیت B نیاز به شناسایی چندین نشانگر سرولوژیکی است که در طول سه مرحله (انکوباسیون، حاد و بهبود) عفونت بیان می شود.

جزء اصلی ویروس آنتی ژن هسته ای هپاتیت B (HBcAg) است.این آنتی ژن هسته ای از یک پلی پپتید تک با وزن تقریباً 17kD تشکیل شده است که در هنگام تجزیه ذرات هسته آزاد می شود.حداقل یک تعیین کننده ایمنی در آنتی ژن وجود دارد.

مدت کوتاهی پس از شروع HBsAg، آنتی بادی های HBcAg (آنتی بادی کل ضد HBc و IgM) ظاهر می شوند و هرگز از بین نمی روند.یک عفونت هپاتیت B می تواند بدون آنتی بیوتیک های HBc تشخیص داده می شوداین بیماری معمولا در بیماران با سیستم ایمنی کم شده دیده می شود. غربالگری برای ضد HBc داده هایی را در مورد شیوع هپاتیت B در جمعیت های مختلف به دست می آورد. این به این دلیل است که ضد HBc نشانگر بیماری حاد است.مزمن، یا عفونت HBV از بین رفته است. شناسایی آنتی HBc در هنگام تشخیص در یک محیط بالینی حیاتی است. همراه با سایر آزمایشات هپاتیت B،نشانگر ضد HBc تشخیص صحیح و نظارت مناسب بر پیشرفت ویروس را امکان پذیر می کند.آنتی HBc ممکن است تنها شاخص عفونت هپاتیت B باشد (از جمله سایر آزمایشات بیماران HBsAg منفی).

سیستم آزمایش HBcAb ELISA بر اساس اصل رقابت فاز جامد، تک مرحله ای است.این ماده با آنتی HBc تک کلونی که به پروکسیداز هویج (HRP-Conjugate) ترکیب شده است، برای یک مقدار ثابت از HBcAg خالص شده که در میکروپلاکت پوشش داده شده است، رقابت می کند.اگر هیچ آنتی HBc وجود نداشته باشد، HRP-conjugated anti-HBc با آنتی ژن ها در داخل چاه ها متصل می شود. در طول شستشوی، هر HRP-Conjugate غیر مرتبط حذف می شود.پس از اضافه کردن محلول های کروموجن A و B به چاه ها و در طول انکوبیشن، یک محصول آبی ظاهر می شود. پس از متوقف کردن واکنش با اسید سولفوریک، رنگ آبی زرد می شود. وجود آنتی بادی های HBcAg در نمونه با رنگ پایین نشان داده می شود،یا هیچ رنگی وجود ندارد.

الزامات نمونه گیری

1.جمع آوری نمونه ها:هیچ آماده سازی ویژه ای برای بیمار لازم نیست. نمونه را مطابق با شیوه های آزمایشگاهی معمولی جمع آوری کنید. یا نمونه های تازه سرم/پلازما را می توان با این آزمایش استفاده کرد.خون جمع آوری شده توسط تزریق وریدی باید به طور طبیعی و کامل لخته شود باید سرم را در اسرع وقت از لخته جدا کنید تا از همولیز خون قرمز جلوگیری شودباید مراقب باشید که نمونه های سرم/پلازما شفاف باشند و توسط میکروارگانیسم ها آلوده نشوند.

2.Hنمونه های لیپمیک، یکتریک یا هیمولیتیک نباید مورد آزمایش قرار گیرند. استفاده شدهچون مي تونن در آزمايش نتيجه غلط بدن.گرمای غیر فعال نکنید نمونه هااین امر می تواند منجر به خراب شدن محلول هدف شود. نمونه هایی با آلودگی میکروبی قابل مشاهده هرگز نباید استفاده شوند.

3. HBcAb ELISA فقط برای آزمایش نمونه های انفرادی سرم/پلازما مورد استفاده قرار می گیرد. از این آزمایش برای آزمایش نمونه های جسد، بزاق، ادرار یا سایر مایعات بدن یا خون مخلوط استفاده نکنید.

4حمل و نقل و ذخیره سازی: نمونه ها را در ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد نگهداری کنید. نمونه هایی که برای آزمایش در عرض ۳ روز مورد نیاز نیستند باید یخ زده (بیش از ۲۰ درجه سانتیگراد) نگهداری شوند. از چرخه های متعدد یخ زدگی و ذوب اجتناب کنید.برای حمل، نمونه ها باید با توجه به مقررات محلی و بین المللی موجود برای حمل و نقل نمونه های بالینی و عوامل اتولوژیکی بسته بندی و برچسب گذاری شوند.

روش آزمایش

1قبل از استفاده باید اجازه داده شود که تمام واکنش ها به دمای اتاق برای 15 دقیقه برسند.

2. پیش از استفاده با آب تقطیر شده با سرعت تخلیه 1:40 آب شوینده را تخلیه کنید.

3نمونه باید متناسب با تعداد میکروپلاکت باشد، هر صفحه باید با کنترل منفی 3 چاه، کنترل مثبت 2 چاه و کنترل خالی 1 چاه فراهم شود.(اگر با تشخیص طول موج دوگانه تشخیص داده شود، تنظیم هیچ چاه کنترل خالی مجاز نیست).

توجه: برای جلوگیری از آلودگی متقاطع، از نوک پیپیت دفع کننده جداگانه برای هر نمونه، کنترل منفی و مثبت استفاده کنید.

4نمونه 50μL را به چاه مربوطه اضافه کنید (وقتی این کیت برای تشخیص بالینی استفاده می شود، نمونه مورد آزمایش باید با محلول نمکی معمولی در 1:30 برای آزمایش رقیق شود.هنگامی که برای تحقیقات اپیدمیولوژیکی استفاده می شود، نمونه اصلی قابل تشخیص است ) ، کنترل منفی و کنترل مثبت را به چاه های کنترل منفی و چاه های کنترل مثبت 50μL اضافه کنید.به ترتیب افزودن آنزیم کنژوگات 50μL (در چاه خالی اضافه نکنید).

5برای 30 ثانیه با یک نوسان دهنده تکان دهید (این مرحله بسیار مهم است). در 37 °C برای 30 دقیقه با غشای صفحه مهر و موم کردن صفحه، انکوبیشن کنید.

6. در پایان حشره کشی، پوشش بشقاب را بردارید و دور بیندازید. خارج کنید، برای 20 ثانیه به هر چاه آب شویی اضافه کنید. 5 بار تکرار کنید. پس از چرخه شستشوی نهایی، آب شویی را به صورت یک قطعه از آب شویی اضافه کنید.بشقاب را روی کاغذ یا حوله تمیز بگذارید.و به آن ضربه بزنید تا بقایای موجود را از بین ببرید.

7. سبسترات A (50μL) و سبسترات B (50μL) را اضافه کنید (در چاه خالی اضافه نکنید). با تکان دادن به آرامی مخلوط کنید. در 37 ° C برای 15 دقیقه با غشای صفحه مهر و موم، صفحه را مهر و موم کنید.

8. 50μL Stop Solution را به هر چاه اضافه کنید (به چاه خالی اضافه نکنید). با تکان دادن به آرامی مخلوط کنید، جذب را در عرض 10 دقیقه پس از متوقف شدن واکنش بخوانید.کالیبراسیون خواننده صفحه با چاه خالی و خواندن جذب در 450nmاگر از یک ابزار فیلتر دوگانه استفاده می شود، طول موج مرجع را در 630nm تنظیم کنید. اگر از طول موج دوگانه برای تشخیص استفاده کنید، هیچ چاه خالی مجاز نیست. مقدار Cut-off را محاسبه کنید و نتایج را ارزیابی کنید.