1تعداد مایکروول های مورد نظر را محاسبه کنید. مایکروول های باقی مانده را بردارید و آنها را با خشک کن در
کیسه پلاستیکی قابل بسته بندی مجدد، مهر و موم شده و در ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد برای استفاده بعدی نگهداری شود.
2کالیبراسیون ها و نمونه ها را اضافه کنید:
2چاه خالی: واکنش دهنده ها را اضافه نکنید.
22 چاه کالیبراسیون: 100 μl از کالیبراسیون ها را به چاه های کنترل تعیین شده اضافه کنید.
2.3 چاه های آزمایش: 100 لیتر نمونه رقیق کننده را به چاه های آزمایش اضافه کنید، سپس 10 لیتر نمونه را به چاه مربوطه اضافه کنید.
2.4 به آرامی صفحه را برای 20 ثانیه تکان دهید و سپس صفحه را با مهر و موم بپوشانید.
3تزریق: تخته را در 37 درجه سانتیگراد برای 30 دقیقه تزریق کنید.
4. شستن مرحله (می تواند به صورت دستی و یا با شستن خودکار انجام شود):
شستشوی دستی: مخلوط انکوبیشن را با دقت از بین ببرید و محلول را در یک ظروف زباله دور بریزید.
به خوبی با 350 μL آبجو پاک کننده رقیق شده و به آرامی برای 20-30 ثانیه تکان دهید. محلول شستشو را به طور کامل دور بریزید. تکرار 4
بعد از اتمام آخرین مرحله شستن، روی کاغذ جذب کننده ضربه بزنید تا مایعات باقی مانده را حذف کنید.
شستشوی خودکار: شستشوی خودکار بشقاب باید برای اطمینان از شستشوی کارآمد کالیبراسیون شود. هر چاه را با 350 μL پر کنید
آبشورهای شسته شده را رقیق کنید و به مدت ۲۰ تا ۳۰ ثانیه خیس کنید. تمام چاه ها را به طور کامل جذب کنید. ۴ بار دیگر تکرار کنید.
5ترکیب: 100 μl ترکیب را به هر چاه به جز چاه خالی اضافه کنید.
6انکوبیشن: چاه ها را بپوشانید و در 37 درجه سانتیگراد برای 30 دقیقه انکوبیشن کنید.
7مرحله شستن: بشویید بشقاب 5 بار به عنوان در مرحله 4 توصیف شده است.
8زیربنای: اضافه کردن 50 μL از زیربنای A و 50 μL از زیربنای B به هر چاه، از جمله چاه خالی.
مایکروول ها برای 20 ثانیه در 37 درجه سانتیگراد در تاریکی برای 15 دقیقه انکوبیشن.
9. محلول توقف: 50 μL محلول توقف را به هر چاه اضافه کنید. یک رنگ زرد باید در چاه هایی که نمونه های مثبت دارند ایجاد شود.
10. نتایج را بخوانید: در ۴۵۰/ ۶۳۰- ۷۰۰ نانومتر در عرض ۳۰ دقیقه بخوانید.
1توجه: میکروپلاکت همچنین می تواند در 450 nm خوانده شود، اما به شدت توصیه می شود که آن را در 450/630-700 nm برای
نتایج بهتری.
زمان سنجی: چگالی نوری نمونه را با یک خواننده صفحه کوچک در 450 نانومتر بخوانید.
میانگین مقدار OD کنترل منفی ≤ 0.1 و میانگین مقدار OD کنترل مثبت ≥ 0.8تست معتبر است.
در غیر این صورت، آزمایش بی اعتبار است.
ارزش قطع (C.O.) = میانگین OD از کنترل منفی x 3 (حساب شده توسط 0.10 زمانی که میانگین
مقدار OD کنترل منفی < 0.10، محاسبه شده بر اساس ارزش واقعی زمانی که کنترل منفی متوسط OD
پیام شما باید بین 20 تا 3000 کاراکتر باشد!
Persian
