|
جزئیات محصول:
|
| هدف: | فقط برای استفاده تحقیقاتی | ذخیره سازی: | 2-8 درجه سانتیگراد |
|---|---|---|---|
| مشخصات: | 48 چاه / 96 چاه | روش: | ساندویچ |
| Cat. گربه No. خیر: | در Mo1153 | رزومه(٪): | SD/MeanX100 |
| برجسته کردن: | E Cadherin Elisa Kit,Mouse E Cad Elisa Kit,Research E Cadherin Elisa Kit,Mouse E Cad Elisa Kit,Research E Cadherin Elisa Kit |
||
موس E-Cadherin، کیت E-Cad ELISA
این کیت ELISA از روش Sandwich-ELISA استفاده می کند.نوار Microelisa ارائه شده در این کیت با آنتی بادی مخصوص E-Cad از قبل پوشش داده شده است.استانداردها یا نمونه ها به چاه های نواری Microelisa مناسب اضافه می شوند و با آنتی بادی خاص ترکیب می شوند.سپس یک آنتی بادی کونژوگه با پراکسیداز ترب (HRP) مخصوص E-Cad به هر چاه نواری Microelisa اضافه شده و انکوبه می شود.اجزای رایگان شسته می شوند.محلول بستر TMB به هر چاه اضافه می شود.فقط آن چاه هایی که حاوی آنتی بادی E-Cad کونژوگه E-Cad و HRP هستند، به رنگ آبی ظاهر می شوند و پس از افزودن محلول توقف، زرد می شوند.چگالی نوری (OD) به روش اسپکتروفتومتری در طول موج 450 نانومتر اندازه گیری می شود.مقدار OD متناسب با غلظت E-Cad است.می توانید غلظت E-Cad در نمونه ها را با مقایسه OD نمونه ها با منحنی استاندارد محاسبه کنید.
مواد ارائه شده به همراه کیت
| مواد ارائه شده به همراه کیت | 48 تعیین | 96 تعیین | ذخیره سازی | |
| 1 | راهنمای کاربری | 1 | 1 | RT |
| 2 | غشای صفحه بسته | 2 | 2 | RT |
| 3 | کیسه های مهر و موم شده | 1 | 1 | RT |
| 4 | نوار میکروالیزا | 1 | 1 | 2-8 درجه سانتیگراد |
| 5 | استاندارد: 108 pg/ml | 0.5 میلی لیتر × 1 بطری | 0.5 میلی لیتر × 1 بطری | 2-8 درجه سانتیگراد |
| 6 | رقیق کننده استاندارد | 1.5 میلی لیتر × 1 بطری | 1.5 میلی لیتر × 1 بطری | 2-8 درجه سانتیگراد |
| 7 | معرف HRP-Conjugate | بطری 3 میلی لیتر × 1 | بطری 6 میلی لیتر × 1 | 2-8 درجه سانتیگراد |
| 8 | رقیق کننده نمونه | بطری 3 میلی لیتر × 1 | بطری 6 میلی لیتر × 1 | 2-8 درجه سانتیگراد |
| 9 | محلول کروموژن A | بطری 3 میلی لیتر × 1 | بطری 6 میلی لیتر × 1 | 2-8 درجه سانتیگراد |
| 10 | محلول کروموژن B | بطری 3 میلی لیتر × 1 | بطری 6 میلی لیتر × 1 | 2-8 درجه سانتیگراد |
| 11 | راه حل توقف | بطری 3 میلی لیتر × 1 | بطری 6 میلی لیتر × 1 | 2-8 درجه سانتیگراد |
| 12 | محلول شستشو | 20 میلی لیتر (20X) × 1 بطری | 20 میلی لیتر (30X)×1 بطری | 2-8 درجه سانتیگراد |
روش
رقیق سازی استانداردها
1. ده چاه برای استانداردها در نوار Microelisa تنظیم شده است.در چاه 1 و چاه 2، 100 میکرولیتر محلول استاندارد و 50 میکرولیتر بافر رقت استاندارد اضافه شده و به خوبی مخلوط می شوند.در چاه 3 و چاه 4، 100 میکرولیتر محلول از چاه 1 و چاه 2 به ترتیب اضافه می شود.سپس 50 میکرولیتر بافر رقت استاندارد اضافه می شود و به خوبی مخلوط می شود.محلول 50 میکرولیتر از چاه 3 و چاه 4 دور ریخته می شود. در چاه 5 و چاه 6، 50 میکرولیتر محلول از چاه 3 و چاه 4 به ترتیب اضافه می شود.سپس 50 میکرولیتر بافر رقت استاندارد اضافه می شود و به خوبی مخلوط می شود.در چاه 7 و چاه 8 به ترتیب 50 میکرولیتر محلول از چاه 5 و چاه 6 اضافه می شود.سپس 50 میکرولیتر بافر رقت استاندارد اضافه می شود و به خوبی مخلوط می شود.در چاه 9 و چاه 10 به ترتیب 50 میکرولیتر محلول از چاه 7 و چاه 8 اضافه می شود.سپس 50 میکرولیتر بافر رقت استاندارد اضافه می شود و به خوبی مخلوط می شود.محلول 50 میکرولیتر از چاه 9 و چاه 10 دور ریخته می شود. پس از رقیق سازی، حجم کل در همه چاهک ها 50 میکرولیتر و غلظت ها به ترتیب 24 نانوگرم در میلی لیتر، 16 نانوگرم در میلی لیتر، 8 نانوگرم در میلی لیتر، 4 نانوگرم بر میلی لیتر و 2 نانوگرم بر میلی لیتر است. .
2. در نوار Microelisa، یک چاه را به عنوان شاهد خالی بگذارید.در چاهک های نمونه، 40 میکرولیتر بافر رقت نمونه و 10 میکرولیتر نمونه اضافه می شود (ضریب رقت 5 است).نمونه ها باید بدون دست زدن به دیواره چاه در پایین بارگذاری شوند.با تکان دادن ملایم خوب مخلوط کنید.
3. جوجه کشی: 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد پس از مهر و موم شدن با غشای صفحه بسته شدن انکوبه کنید.
4. رقیق سازی: بافر غلیظ شستشو را با آب مقطر رقیق کنید (30 بار برای 96T و 20 بار برای 48T).
5. شستشو: غشای صفحه بسته را با دقت جدا کنید، آسپیره کنید و دوباره با محلول شستشو پر کنید.پس از 30 ثانیه استراحت محلول شستشو را دور بریزید.روش شستشو را 5 بار تکرار کنید.
6. 50 میکرولیتر معرف HRP-Conjugate را به هر چاهک به جز چاه شاهد خالی اضافه کنید.
7. جوجه کشی همانطور که در مرحله 3 توضیح داده شد.
8. شستشو همانطور که در مرحله 5 توضیح داده شد.
9. رنگ آمیزی: 50 میکرولیتر محلول کروموژن A و 50 میکرولیتر محلول کروموژن B را به هر چاهک اضافه کنید، با تکان دادن ملایم مخلوط کنید و به مدت 15 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه کنید.لطفا در هنگام رنگ آمیزی از نور اجتناب کنید.
10. خاتمه: 50 میکرولیتر محلول توقف را به هر چاهک اضافه کنید تا واکنش خاتمه یابد.رنگ در چاه باید از آبی به زرد تغییر کند.
11. جذب OD را در 450 نانومتر با استفاده از صفحه خوان میکروتیتر بخوانید.مقدار OD چاه کنترلی خالی برابر با صفر تنظیم می شود.آزمایش باید در عرض 15 دقیقه پس از افزودن محلول توقف انجام شود.
دقت، درستی
دقت درون سنجش (دقت درون یک سنجش): 3 نمونه با سطح E-Cad پایین، متوسط و بالا به ترتیب 20 بار بر روی یک صفحه آزمایش شدند.
دقت بین سنجش (دقت بین سنجش): 3 نمونه با سطح پایین، متوسط و بالا E-Cad بر روی 3 صفحه مختلف، 8 تکرار در هر پلیت مورد آزمایش قرار گرفتند.
CV(%) = SD/MeanX100
درون سنجش: CV<10%
بین سنجش: CV<12%
محدوده سنجش
0.6pg/ml -80pg/ml
حساسیت:
0.1 pg/ml
تماس با شخص: Mr. Steven
تلفن: +8618600464506
