Mouse Estradiol Elisa Kit Rat E2 RUO Test Kit 48 Wells and 96 Wells

استرادیول موش، کیت E2 ELISA

یادداشت:

• استخراج نمونه و سنجش الایزا باید در اسرع وقت پس از جمع آوری نمونه انجام شود.نمونه ها باید با توجه به ادبیات مربوطه استخراج شوند.اگر سنجش الایزا را نتوان فورا انجام داد، نمونه ها را می توان در دمای 20- درجه سانتیگراد نگهداری کرد. از تکرار سیکل های انجماد و ذوب باید اجتناب شود.
• کیت های ما را نمی توان برای نمونه هایی با NaN3 استفاده کرد که می تواند فعالیت HRP را مهار کند.

مواد ارائه شده به همراه کیت

روش

رقیق سازی استانداردها

1. ده چاه برای استانداردها در نوار Microelisa تنظیم شده است.در چاه 1 و چاه 2، 100 میکرولیتر محلول استاندارد و 50 میکرولیتر بافر رقت استاندارد اضافه شده و به خوبی مخلوط می شوند.در چاه 3 و چاه 4، 100 میکرولیتر محلول از چاه 1 و چاه 2 به ترتیب اضافه می شود.سپس 50 میکرولیتر بافر رقت استاندارد اضافه می شود و به خوبی مخلوط می شود.محلول 50 میکرولیتر از چاه 3 و چاه 4 دور ریخته می شود. در چاه 5 و چاه 6، 50 میکرولیتر محلول از چاه 3 و چاه 4 به ترتیب اضافه می شود.سپس 50 میکرولیتر بافر رقت استاندارد اضافه می شود و به خوبی مخلوط می شود.در چاه 7 و چاه 8 به ترتیب 50 میکرولیتر محلول از چاه 5 و چاه 6 اضافه می شود.سپس 50 میکرولیتر بافر رقت استاندارد اضافه می شود و به خوبی مخلوط می شود.در چاه 9 و چاه 10 به ترتیب 50 میکرولیتر محلول از چاه 7 و چاه 8 اضافه می شود.سپس 50 میکرولیتر بافر رقت استاندارد اضافه می شود و به خوبی مخلوط می شود.محلول 50 میکرولیتر از چاه 9 و چاه 10 دور ریخته می شود. پس از رقیق سازی، حجم کل در همه چاهک ها 50 میکرولیتر و غلظت pg/ml 120، pg/ml 80، pg/ml 40، pg/ml 20 و pg/ml 10 می باشد. ، به ترتیب

2. در نوار Microelisa، یک چاه را به عنوان شاهد خالی بگذارید.در چاهک های نمونه، 40 میکرولیتر بافر رقت نمونه و 10 میکرولیتر نمونه اضافه می شود (ضریب رقت 5 است).نمونه ها باید بدون دست زدن به دیواره چاه در پایین بارگذاری شوند.با تکان دادن ملایم خوب مخلوط کنید.

3. جوجه کشی: 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد پس از مهر و موم شدن با غشای صفحه بسته شدن انکوبه کنید.

4. رقیق سازی: بافر غلیظ شستشو را با آب مقطر رقیق کنید (30 بار برای 96T و 20 بار برای 48T).

5. شستشو: غشای صفحه بسته را با دقت جدا کنید، آسپیره کنید و دوباره با محلول شستشو پر کنید.پس از 30 ثانیه استراحت محلول شستشو را دور بریزید.روش شستشو را 5 بار تکرار کنید.

6. 50 میکرولیتر معرف HRP-Conjugate را به هر چاهک به جز چاه شاهد خالی اضافه کنید.

7. جوجه کشی همانطور که در مرحله 3 توضیح داده شد.

8. شستشو همانطور که در مرحله 5 توضیح داده شد.

9. رنگ آمیزی: 50 میکرولیتر محلول کروموژن A و 50 میکرولیتر محلول کروموژن B را به هر چاهک اضافه کنید، با تکان دادن ملایم مخلوط کنید و به مدت 15 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه کنید.لطفا در هنگام رنگ آمیزی از نور اجتناب کنید.

10. خاتمه: 50 میکرولیتر محلول توقف را به هر چاهک اضافه کنید تا واکنش خاتمه یابد.رنگ در چاه باید از آبی به زرد تغییر کند.

11. جذب OD را در 450 نانومتر با استفاده از صفحه خوان میکروتیتر بخوانید.مقدار OD چاه کنترلی خالی برابر با صفر تنظیم می شود.آزمایش باید در عرض 15 دقیقه پس از افزودن محلول توقف انجام شود.

دقت، درستی

دقت درون سنجش (دقت درون یک سنجش): 3 نمونه با سطح E2 پایین، متوسط ​​و بالا به ترتیب 20 بار بر روی یک صفحه آزمایش شدند.

دقت بین سنجش (دقت بین سنجش): 3 نمونه با سطح E2 پایین، متوسط ​​و بالا بر روی 3 پلیت مختلف، 8 تکرار در هر پلیت مورد آزمایش قرار گرفتند.

CV(%) = SD/MeanX100

درون سنجش: CV<10%

بین سنجش: CV<12%

محدوده سنجش

1.8 pg/ml -150 pg/ml