کیت RUO HBcAb Elisa

هدف از آزمایش RUO HBcAb ELISA برای تشخیص کیفی آنتی بادی ها در برابر آنتی ژن هسته ای ویروس هپاتیت B در سرم/پلازما انسان است.

به عنوان بخشی از خانواده Hepadnaviridae، HBV یک ویروس DNA دو رشته ای است که علت اصلی انتقال هپاتیت از طریق خون است.اثرات عفونت HBV از هپاتیت خفیف تا شدید می باشدبرای طبقه بندی عفونت هپاتیت B،نشانگرهای سرولوژیکی باید در طول سه مرحله از عفونت شناسایی شوند.، حاد و بهبود یافته است. جزء اصلی این ویروس آنتی ژن هسته ای هپاتیت B (HBcAg) است.این آنتی ژن هسته ای از یک پلی پپتید تک با وزن تقریباً 17kD تشکیل شده است که در هنگام تجزیه ذرات هسته آزاد می شود.حداقل یک تعیین کننده ایمنی در آنتی ژن وجود دارد. مدت کوتاهی پس از شروع HBsAg، آنتی بادی های HBcAg (آنتی بادی کل ضد HBc و IgM) ظاهر می شوند و هرگز از بین نمی روند. در موارد جداگانه,عفونت هپاتیت B می تواند بدون آنتی بیوتیک های هپاتیت B که از نظر ایمنی قابل تشخیص هستند، به وجود آید. این بیماری معمولا در بیماران با سیستم ایمنی ضعیف دیده می شود.غربالگری برای ضد HBc داده های مربوط به شیوع هپاتیت B در جمعیت های مختلف را ارائه می دهداین به این دلیل است که آنتی HBc نشانگر عفونت حاد، مزمن یا حل شده HBV است. شناسایی آنتی HBc هنگام تشخیص در یک محیط بالینی حیاتی است.همراه با سایر آزمایش های هپاتیت B، نشانگر ضد HBc تشخیص صحیح و نظارت مناسب بر پیشرفت ویروس را امکان پذیر می کند.آنتی HBc ممکن است تنها شاخص عفونت هپاتیت B باشد (از جمله سایر آزمایشات بیماران HBsAg منفی).

مواد و اجزا

مایکروپلات:نوارهای میکروول خالی بر روی حامل نوار سفید ثابت شده است. صفحه در کیسه آلومینیومی با خشاب بسته شده است. هر چاه حاوی HBcAg تصفیه شده است. نوارهای میکروول می توانند برای استفاده جداگانه شکسته شوند.چاه ها یا نوارهای استفاده نشده را در کیسه ذخیره سازی پلاستیکی بسته شده همراه با خشک کننده قرار دهید و به 2-8 °C برگردانیدبعد از باز شدن، برای یک ماه در دمای 2-8 درجه سانتیگراد ثابت است.

کنترل منفی:(1x1. 0 میلی لیتر در هر شیرینی)0.1٪ ProClin TM 300 مایع زرد رنگ پر شده در یک بطری با سرپوش پیچ سبز است. بافر استقرار شده با پروتئین برای HBcAb آزمایش نشده است. آماده برای استفاده به عنوان عرضه شده است. پس از باز شدن، برای یک ماه در 2-8 ° C پایدار است.

کنترل مثبت:(1x1. 0 میلی لیتر در هر شیرینی)0.1٪ ProClin TM 300 مایع قرمز پر شده در یک بطری با سرپوش پیچ قرمز. HBcAb در بافر پایدار شده با پروتئین رقیق شده است. آماده استفاده به عنوان عرضه شده است. پس از باز شدن، برای یک ماه در 2- 8 ° C پایدار است.

کنژوگیت:(1x6 میلی لیتر در هر ورق) نگهدارنده0.1٪ ProClinTM 300 مایع قرمز در یک شیرینی سفید با سرپوش پیچ قرمز. آنتی بادی های مونوکلونال به HBcAg که با پروکسیداز هورسراچ ترکیب شده اند. آماده استفاده به عنوان عرضه شده است.برای یک ماه در ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد پایدار.

بازکن شستشو:(1x20 میلی لیتر در هر بطری) قبل از استفاده رقیق کنید!4، 20 × PBS غلظت باید رقیق شوداز 1 تا 19قبل از استفاده با آب تقطیر شده / دیونیزه شده. پس از رقیق شدن، برای یک هفته در دمای اتاق، یا برای دو هفته در 2-8 °C نگهداری می شود.

زیربنای A:(1x6ml در هر بطری) مایع بی رنگ پر شده در یک بطری سفید با سرپوش پیچ سبز. محلول پروکسید اورئیا. آماده برای استفاده به عنوان عرضه شده است. پس از باز شدن، برای یک ماه در 2- 8 °C پایدار است.

زیربنای B:(1x6ml در هر بطری) مایع بی رنگ پر شده در یک بطری سیاه با سرپوش پیچ سیاه.

راه حل توقف:(1x6ml در هر بطری) مایع بی رنگ در یک بطری سفید با سرپوش پیچ سفید. محلول اسید سولفوریک رقیق شده (0.5M H₂پس₄) آماده برای استفاده به عنوان عرضه شده است.

کیسه ای از پلاستیکبرای بسته کردن نوارهای غیر استفاده شده 1 واحد

ورودی بستهیک کپی

پوشش صفحه گیتاب2 ورق

برای پوشاندن صفحات در طول انکوباسیون و جلوگیری از تبخیر یا آلودگی چاه ها.

روش

آمپول های آماده سازی:اجازه دهید که واکنشگرها به دمای اتاق (18-30°C) برسند. آب پاشنده شستشو (20X) را همانطور که در دستورالعمل های شستشو نشان داده شده است، رقیق کنید.برای رقیق کردن بافر از آب تقطیر شده یا غیر یونیزه استفاده کنید و فقط ظرف های تمیز استفاده کنید.تمام واکنشگرهای دیگرآماده استفاده.

1. آماده سازی:برای نمونه کنترل و بیمار که مورد آزمایش قرار می گیرند، چاه های میکروپلاکت را فرمت کنید. هر نوار میکروول استفاده نشده را به مهر کیسه آلومینیومی برگردانید و در 2-8 درجه سانتیگراد نگهداری کنید.
2. اضافه کردن نمونه:50μl از کنترل یا نمونه ها را به چاه تعیین شده اضافه کنید.
3. اضافه کردن جفت:50μl ازکنژوقاتبه هر چاه جز چاه خالي
4. تخم گذاری:بشقاب را با پوشش بشقاب بپوشانید و برای 3 ساعت حشره بزنید.0 دقیقه هادر 37 درجه سانتیگراد
5. شستن:در پایان انکوبیشن، پوشش بشقاب را بردارید و دور بیندازید. هر چاه را 5 بار با پاک کننده شستشو رقیق بشویید. هر بار اجازه دهید مایکروچاله ها برای 30-60 ثانیه خیس شوند.بعد از آخرین چرخه شستن، صفحه را روی کاغذ پاک کننده یا حوله تمیز کنید و برای حذف بقایای آن ضربه بزنید.
6. اضافه کردن زیربنای:50μl محلول سبسترات A و 50μl محلول سبسترات B را به هر چاه اضافه کنید.ده دقیقهدر 37 درجه سانتیگراد و اجتناب از نور.
7. اضافه کردن راه حل توقف:با استفاده از یک پیپت چند کانال یا به صورت دستی، اضافه کنید50μمناز Stop Solution را به هر چاه بریزید و به آرامی مخلوط کنید.
8. اندازه گیری جذب:کالیبراسیون خواننده صفحه با چاه خالی و خواندن جذب در۴۵۰nm. اگر از یک ابزار فیلتر دوگانه استفاده می شود، طول موج مرجع را در630nmمحاسبه ارزش قطع و ارزیابی نتایج (يادداشت:جذب را در داخلده دقیقهبعد از توقف واکنش).