کیت تست ویتامین E الیزای

نام داروها

نام عمومی: کیت آزمایش ویتامین E Elisa

هدف

این کیت برای تعیین غلظت VE در نمونه است.

اصول آزمایش

کليد از رقابت ELISA براي اندازه گيري سطح VE در نمونه استفاده ميکنه، از آنتی بادي خالص شده VE براي پوشش صفحه ميکروتيتر استفاده ميکنه،اضافه کردن VE و آنتی بادی که با HRP برچسب شده VE به چاه های پوشش داده شده میکروتیتربعد از شستشوی کامل، محلول بستر TMB را اضافه کنید. عمق رنگ و VE نمونه به طور مثبت مرتبط بودند.اندازه گیری تراکم نوری (OD) در 450 نانومتر با خواننده صفحه میکروتیتر، غلظت VE را با منحنی استاندارد محاسبه کنید.

الزامات نمونه

10 غشای صفحه بسته 2 1

1.برنامه نمونه برداری:

(1) نمونه های آب سه بار پس از استخراج تکرار چرخه های یخ زدگی و ذوب شد. سپس با فیبر شیشه ای، مرجع فیلتر شود.

(2) نمونه های بافت با n-butanol: متانول: آب (5:25:70 V: V: V) استخراج، یا استخراج بر اساس ادبیات مربوطه. آزمایش در اسرع وقت پس از استخراج..

2نموني که NaN3 رو داره نميشه کشف کرد چون NaN3 فعاليت HRP رو مهار ميکنه

شستشويي بر نتيجه تاثيري نداره.

روش ارزیابی

• نمونه را اضافه کنید: نمونه های خالی را به طور جداگانه تنظیم کنید (نابرهای مقایسه خالی نمونه و واکنشگر ELISA را اضافه نمی کنند، در غیر این صورت هر مرحله عمل یکسان است).به نمونه ی آزمایش که بر روی صفحه ی ELISA پوشانده شده است، 40μl رقیق کننده نمونه اضافه کنید.سپس نمونه آزمایش را به 10μl اضافه کنید (درجه رقیق شدن نهایی نمونه 5 برابر است) ، نمونه را به کف بشقاب های ELISA که به خوبی پوشانده شده اند اضافه کنید ، تا جایی که ممکن است به دیوار لمس نکنید و به آرامی مخلوط کنید.
• اضافه کردن آنزیم: 50μl از واکنشگرهای ELISA را به هر جوش اضافه کنید، به غیر از جوش خالی.
• مایع را تنظیم کنید: 30 بار Wash Concentrate که 30 بار با آب تقطیر شده و ذخیره شده رقیق می شود.
• شستشوی: پرده از غشای صفحه بسته شدن را باز کنید، مایع را دور بریزید، با تکان دادن خشک کنید، با اضافه کردن بافرهای شستشوی به هر وزن، برای 30 ثانیه باقی بمانید و سپس آن را خارج کنید، 5 بار تکرار کنید، با ضربه خشک کنید.
• رنگ:رایگانس رنگ A 50μl و رایگانس رنگ B 50μl را به هر یک از ما اضافه کنید. به آرامی مخلوط کنید، برای 10 دقیقه در 37 °C انکوبی کنید.
• متوقف کردن واکنش: اضافه کردن راه حل متوقف 50μl به هر ول، متوقف کردن واکنش ((تغییر رنگ آبی به رنگ زرد بلافاصله).
• اندازه گیری: به عنوان صفر، چگالی نوری (OD) را در 450 nm بعد از اضافه کردن محلول توقف و در عرض 15 دقیقه اندازه گیری کنید.

ذخیره سازی و ثبات

• در ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد نگهداری شود.

• واکنشگرهای استفاده نشده را به درجه 2-8 درجه سانتیگراد مهر بزنید و برگردانید، در این شرایط ثبات برای 2 ماه یا تا تاریخ انقضا برچسب شده حفظ می شود، هر کدام زودتر باشد.